分辨烏龜公母可以通過烏龜的氣味、自身體型大小、龜殼、尾巴、腹部龜甲以及排泄孔的形狀位置等因素來判斷。
烏龜分公母可以從六個方面來看，公龜的氣味比母龜濃；公龜一般比同齡的母龜體型小；公龜的殼是黑色的，而母龜的殼是黃色的；公龜尾巴粗長呈三角狀，母龜尾巴細短呈條狀；公龜的花紋稀疏、腹甲凹陷，母龜腹部的花紋密集、腹甲寬扁；公龜泄殖孔距離尾端較近，母龜距離甲殼較近。
從氣味來判斷。公烏龜的氣味比較濃烈，還會有些臭味；而母龜的異味相對比較淡些。
從體型大小來判斷。公烏龜的個頭會比母烏龜的體型小一些；而母烏龜的體型相對較大。
從龜殼來判斷。公烏龜殼的顏色是黑色，會比較偏深，軀干較長而比較薄；而母烏龜的殼是黃色的，顏色偏淺，身體短而厚。
從尾巴形狀來判斷。公龜的尾巴細長，根部較為粗大，是呈三角狀的；母龜的尾巴比較短又細小，呈條狀，尾根離肛門的距離較近。
從腹甲形狀來判斷。從腹甲外觀來判斷，公烏龜的腹部龜甲是有些凹陷的形狀，這是為了方便繁殖。公烏龜腹甲的2塊肛盾形成的缺刻較淺，缺刻角度較大；而母烏龜的腹部龜甲就相對平坦寬扁些。母烏龜腹甲的2塊肛盾形成的缺刻較深，缺刻角度較小。
從泄殖孔來判斷。觀察泄殖孔與尾端距離及形狀可以看出，公龜泄殖孔在腹甲外部，孔呈長形；母龜的泄殖孔在腹甲內部，呈圓形。按壓烏龜的腹甲時，公龜的生殖器會露在外面，母龜只會流出少量液體。
以上方法適用于較大一點的烏龜的性別判斷，而幼小的烏龜較難區分。也有人會用手抓烏龜甲殼，讓它四腳懸空，若是尾巴有從下往上勾的動作就是公龜，可以用這種方法進行實踐。
